
COMMISSION REGULATION (EC) No 273/2008 of 5 March 2008 laying down detailed rules for the application of Council Regulation (EC) No 1255/1999 as regards methods for the analysis and quality evaluation of milk and milk products (repealed) 

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CHAPTER I
GENERAL PROVISIONS
Subject matter and scope
Article 1 
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Routine methods
Article 2 
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CHAPTER II
METHODS OF ANALYSIS
Evaluation of compliance of a consignment with a legal limit
Article 3 
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Sensory evaluation
Article 4 
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Tracers
Article 5 
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Detection of cows’ milk casein
Article 6 
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Detection of coliforms
Article 7 
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Determination of the lactose content
Article 8 
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Detection of rennet whey
Article 9 
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Detection of buttermilk
Article 10 
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Detection of antimicrobiotic residues
Article 11 
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Determination of skimmed-milk powder content
Article 12 
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Detection of starch
Article 13 
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Determination of moisture content in dried cream
Article 14 
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Determination of moisture content of acid buttermilk powder
Article 15 
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Determination of milk fat purity
Article 16 
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CHAPTER III
GENERAL AND FINAL PROVISIONS
Quality assurance
Article 17 
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Sampling and disputes over the results of analysis
Article 18 
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Transition period
Article 19 
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Notifications
Article 19a 
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Repeals
Article 20 
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Entry into force
Article 21 
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ANNEX I
(Article 1)LIST OF REFERENCE METHODS 

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ANNEX II
(Article 3)EVALUATION OF COMPLIANCE OF A CONSIGNMENT WITH THE LEGAL LIMIT 
 1. PRINCIPLE 

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 2. THE METHOD IS VALIDATED THROUGH INTERNATIONAL COLLABORATION 

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 3. IN-HOUSE VALIDATION WITH CALCULATION OF INTERNAL REPRODUCIBILITY STANDARD DEVIATION 

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ANNEX III
(Article 4)EVALUATION OF ASSESSORS AND THE RELIABILITY OF RESULTS IN SENSORY ANALYSES 

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 A. DETERMINATION OF THE ‘REPEATABILITY INDEX’ 

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 B. DETERMINING THE ‘DEVIATION INDEX’ 

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 C. COMPARISON OF THE RESULTS OBTAINED IN DIFFERENT REGIONS OF A MEMBER STATE AND IN DIFFERENT MEMBER STATES 

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ANNEX IV
(Article 4)SENSORY EVALUATION OF BUTTER 
 1. SCOPE 

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 2. DEFINITIONS 

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 3. TEST ROOM 

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 4. SELECTION OF ASSESSORS 

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 4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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 4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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 5. REQUIREMENTS FOR THE PANEL 

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 6. PERFORMANCE 

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 7. SAMPLING AND PREPARATION OF THE SAMPLE 

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 8. ASSESSMENT OF THE VALUE OF EACH ATTRIBUTE 
 8.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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 8.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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 9. SUPERVISION 

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 10. NOMENCLATURE 

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 11. REFERENCE 

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ANNEX V
(Article 5)DETERMINATION OF THE CONTENT OF ENANTHIC ACID TRIGLYCERIDE IN BUTTER, BUTTER-OIL AND CREAM BY GAS CHROMATOGRAPHIC ANALYSIS OF TRIGLYCERIDES 
 1. SCOPE 

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 2. TERMS AND DEFINITION 

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 3. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. APPARATUS 

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 5.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.7. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.7.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.7.2. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.7.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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 5.7.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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 5.8. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. SAMPLING 

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 7. PROCEDURE 
 7.1. Preparation of the test sample and test portion 

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 7.1.1. Butter-oil, Butter 
 7.1.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.1.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2. Cream 
 7.1.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. Preparation of the calibration standards 
 7.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3. Chromatographic determination 
 7.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. CALCULATION OF RESULTS 

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 8.1. Calibration 
 8.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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 8.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.1.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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 8.2. Test samples 

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 9. PRECISION 

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 9.1. Repeatability 

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 9.2. Reproducibility 

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 10. TOLERANCE LIMITS: LOWER LIMITS (CASE OF INSUFFICIENT QUANTITIES) 
 10.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.2. Butter and concentrated butter 
 10.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.3. Cream 
 10.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 11. TOLERANCE LIMITS: UPPER LIMITS (CASE OF EXCEEDING QUANTITY BY MORE THAN 20 %) 
 11.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 11.2. Butter and concentrated butter 
 11.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 11.3. Cream 
 11.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 12. ADDITIONAL INFORMATION: STATISTICAL ANALYSIS OF RESULTS ON THE DETERMINATION OF TRIENANTOATE IN BUTTERFAT BY TRIGLYCERIDE ANALYSIS 

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Tests for outliers: 

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Precision parameters 

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Figure 1 
Experimental results: Sample A 
Experimental results: Sample B 
Experimental results: Sample C 
Experimental results: Sample D 

ANNEX VI
(Article 5)DETERMINING THE VANILLIN CONTENT IN CONCENTRATED BUTTER, BUTTER OR CREAM BY HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY 
 1. SCOPE AND FIELD OF APPLICATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. APPARATUS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5.1. Vanillin stock solution (= 500 μg/ml) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5.2. Vanillin standard solution (= 10 μg/ml) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5.6. HPLC mobile phase 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. PROCEDURE 
 5.1. Preparation of the test sample 
 5.1.1. Butter 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.1.2. Concentrated butter 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.1.3. Cream 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. Preparation of the test solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. Calibration 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. Determination by HPLC 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. CALCULATION OF THE RESULTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. ACCURACY OF THE METHOD 
 7.1. Repeatability (r) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. Reproducibility (R) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. TOLERANCE LIMITS 
 8.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9. NOTES 
 9.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX VII
(Article 5)DETERMINING THE ETHYL ESTER OF BETA-APO-8'-CAROTENIC ACID IN CONCENTRATED BUTTER AND BUTTER BY SPECTROMETRY 
 1. SCOPE AND FIELD OF APPLICATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. APPARATUS 
 3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. PROCEDURE 
 5.1. Preparation of the test sample 
 5.1.1. Concentrated butter 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.1.2. Butter 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. Determination 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. Calibration 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. CALCULATION OF THE RESULTS 
 6.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. ACCURACY OF THE METHOD 
 7.1. Repeatability 
 7.1.1. Butter analysis 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2. Concentrated butter analysis 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. Reproducibility 
 7.2.1. Butter analysis 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3. Concentrated butter analysis 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.4. Source of precision data 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. TOLERANCE LIMITS 
 8.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2. Butter 
 8.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3. Concentrated butter 
 8.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX VIII
(Article 5)DETERMINING SITOSTEROL OR STIGMASTEROL IN BUTTER OR CONCENTRATED BUTTER BY CAPILLARY-COLUMN GAS CHROMATOGRAPHY 
 1. SCOPE AND FIELD OF APPLICATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. APPARATUS 
 3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.8. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.8.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.8.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.8.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.8.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.9. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.10. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3.1. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.8. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.8.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.9. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.9.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.10. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. METHOD 
 5.1. Preparation of standard solutions for chromatography 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. Preparation of the unsaponifiables 
 5.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. Preparation of trimethyl silyl ethers 
 5.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. Gas-chromatographic analysis 
 5.4.1. Choice of operating conditions 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4.2. Analytical procedure 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. CALCULATION OF RESULTS 
 6.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. ACCURACY OF THE METHOD 
 7.1. Butter 
 7.1.1. Repeatability 
 7.1.1.1. Stigmasterol 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.1.2. Sitosterol 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2. Reproducibility 
 7.1.2.1. Stigmasterol 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2.2. Sitosterol 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.3. Source of precision data 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. Concentrated butter 
 7.2.1. Repeatability 
 7.2.1.1. Stigmasterol 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.1.2. Sitosterol 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.2. Reproducibility 
 7.2.2.1. Stigmasterol 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.2.2. Sitosterol 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.3. Source of precision data 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. TOLERANCE LIMITS 
 8.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2. Butter 
 8.2.1. Stigmasterol 
 8.2.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2.2. Sitosterol 
 8.2.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3. Concentrated butter 
 8.3.1. Stigmasterol 
 8.3.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3.2. Sitosterol 
 8.3.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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ANNEX IX
(Article 6)REFERENCE METHOD FOR THE DETECTION OF COWS’ MILK AND CASEINATE IN CHEESES FROM EWES’ MILK, GOATS’ MILK OR BUFFALOS’ MILK OR MIXTURES OF EWES’, GOATS’ AND BUFFALOS’ MILK 
 1. SCOPE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. FIELD OF APPLICATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. PRINCIPLE OF THE METHOD 
 3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Isoelectric focusing 
 4.1. Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels 
 4.1.1. Stock gel solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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 4.1.2. Gel solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1.3. Catalyst solutions 
 4.1.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2. Contact fluid 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. Anode solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4. Cathode solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Sample preparation 
 4.5. Reagents for protein isolation 
 4.5.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.6. Protein dissolving buffer 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.7. Reagents for plasmin cleavage of caseins 
 4.7.1. Ammonium carbonate buffer 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.7.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.7.3. ε-Aminocaproic acid solution for enzyme inhibition 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.8. Standards 
 4.8.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.8.2. Preparation of laboratory interim-standards of buffalos’ renneted milk containing 0 % and 1 % of cows’ milk 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Reagents for protein staining 
 4.9. Fixative 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.10. Destaining solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.11. Staining solutions 
 4.11.1. Staining solution (stock solution 1) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.11.2. Staining solution (stock solution 2) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.11.3. Staining solution (working solution) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. EQUIPMENT 
 5.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.8. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.9. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.10. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.11. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.12. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.13. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.14. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.15. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.16. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.17. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.18. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.19. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. PROCEDURE 
 6.1. Sample preparation 
 6.1.1. Isolation of caseins 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.1.2. Plasmin cleavage of β-caseins to intensify γ-caseins 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.2. Preparation of the urea containing polyacrylamide gels 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3. lsoelectric focusing 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Conditions for isoelectric focusing: 
 6.3.1. Gel size 265 × 125 × 0,25 mm 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3.2. Example of a voltage programme for an automatic electrophoresis device (2 gels of 5,0 × 4,5 cm), electrodes without strips applied directly to the gel 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.4. Protein staining 
 6.4.1. Protein fixation 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.4.2. Washing and staining the gel plate 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.4.3. Destaining the gel plate 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. EVALUATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1. Visual estimation 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. Densitometric estimation 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. REFERENCES 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
ANNEX X
(Article 7)REFERENCE METHOD FOR DETECTING COLIFORMS IN BUTTER, SKIMMED-MILK POWDER, CASEIN AND CASEINATES 
 1. PREPARATION OF SAMPLES 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. PROCEDURE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. RESULTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX XI
(Article 8)DETERMINATION OF LACTOSE IN COMPOUND FEEDINGSTUFFS 
 1. SCOPE AND FIELD OF APPLICATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. REFERENCE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. DEFINITION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. REAGENTS 
 5.1. General 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. Lactose 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. Concentrated Biggs/Szijarto solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. Diluted Biggs/Szijarto solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.5. Preparation of HPLC grade water 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. APPARATUS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.1. HPLC ion exchange resin column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.2. Guard column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3. Column oven 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.4. HPLC pump 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.5. HPLC injection device 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.6. HPLC detector 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.7. Integrator 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.8. Water purification unit 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.9. Solvent filtration unit 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.10. Analytical balance 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11. Water bath 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.12. Centrifuge 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.13. Volumetric flask 50 mL 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.14. Volumetric flask 100 mL 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.15. Graduated pipette 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. SAMPLING 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. PREPARATION OF LACTOSE STANDARD SOLUTION 
 8.1. Standard 1 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2. Standard 2 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9. PREPARATION OF THE TEST SAMPLE 
 9.1. Reconstitution of the sample 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2. Sample treatment 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10. HPLC DETERMINATION 
 10.1. Preliminary preparation of HPLC 
 10.1.1. Installation of the column and pre-column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.1.2. Detector and initial flow 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.1.3. Column oven and final flow-rate 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.1.4. Integration 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.1.5. Guard column test 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.2. Running standards 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.3. Running samples 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 11. CALCULATION AND EXPRESSION OF THE RESULTS 
 11.1. Calibration 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 11.2. Samples 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 12. PRECISION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 12.1. Repeatability 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 12.2. Reproducibility 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 13. REFERENCES 

ANNEX XII
(Article 9)DETECTION OF RENNET WHEY IN SKIMMED-MILK POWDER FOR PUBLIC STORAGE BY DETERMINATION OF CASEINOMACROPEPTIDES HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC) 
 1. SCOPE AND FIELD OF APPLICATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. REFERENCE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. DEFINITION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.1. Trichloroacetic acid solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. Eluent solution, pH 6,0 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. Flushing solvent 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. Standard samples 
 5.4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. APPARATUS 
 6.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.8. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.9. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.10. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. SAMPLING 
 7.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. PROCEDURE 
 8.1. Preparation of the test sample 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2. Test portion 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3. Removal of fat and proteins 
 8.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.4. Chromatographic determination 
 8.4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.5. Calibration 
 8.5.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.5.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9. EXPRESSION OF RESULTS 
 9.1. Method of calculation and formulae 
 9.1.1. Calculation of the response factors R: 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.1.2. Calculation of the relative area of the peaks in the sample [E] 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.1.3. Calculation of the relative retention time of peak III in sample [E]: RRTIII[E] = (RTIII[E])/(RTIII[5]) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.1.4. Experiments have shown that there is a linear relation between the relative retention time of peak III, i.e. RRTIII [E] and the percentage of whey powder added up to 10 % 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2. Calculation of the percentage of rennet whey powder in the sample: 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.3. Accuracy of the procedure 
 9.3.1. Repeatability 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.3.2. Reproducibility 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.4. Interpretation 
 9.4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.4.3. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.4.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.4.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Skimmed-milk powder 
Skimmed-milk powder 

ANNEX XIII
(Article 9)DETERMINING RENNET WHEY SOLIDS IN SKIMMED-MILK POWDER AND THE MIXTURES REFERRED TO IN REGULATION (EC) No 2799/1999 
 1. PURPOSE: DETECTING THE ADDITION OF RENNET WHEY SOLIDS TO: 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. REFERENCES: INTERNATIONAL STANDARD ISO 707 
 3. DEFINITION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.1. Trichloroacetic acid solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. Eluents A and B 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. Conservation of the column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. Standard samples 
 5.4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. APPARATUS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.8. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.9. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.10. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.11.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. SAMPLING 
 7.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. PROCEDURE 
 8.1. Preparation of the test sample 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.2. Test portion 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3. Removal of fat and proteins 
 8.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.4. Chromatographic determination 
 8.4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.4.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.5. Calibration 
 8.5.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.5.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8.5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9. EXPRESSION OF RESULTS 
 9.1. Method of calculation and formulae 
 9.1.1. Calculation of the response factor R: 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2. Calculation of the percentage of rennet whey powder in the sample 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.3. Accuracy of the procedure 
 9.3.1. Repeatability 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.3.2. Reproducibility 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.3.3. Linearity 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.4. Interpretation 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 Table 1 Ni –4,6 standard 

ANNEX XIV
(Article 10)SKIMMED-MILK POWDER: QUANTITATIVE DETERMINATION OF PHOSPHATIDYLSERINE AND PHOSPHATIDYLETHANOLAMINE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 1. PURPOSE AND FIELD OF APPLICATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. DEFINITION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. PRINCIPLE OF THE METHOD 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1. Standard material: PEDP, at least 99 % pure 
 4.2. Reagents for standard sample and test sample preparation 
 4.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. Reagents for o-phthaldialdehyde derivatisation 
 4.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4. HPLC elution solvents 
 4.4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. APPARATUS 
 5.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.8. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.9. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.10. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.11. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.12. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.13. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.13.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.13.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.13.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.13.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.13.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.13.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. SAMPLING 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. PROCEDURE 
 7.1. Preparation of the internal standard solution 
 7.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. Preparation of the test sample solution 
 7.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3. Preparation of the external standard solution 
 7.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.4. Preparation of the derivatising reagent 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.5. Determination by HPLC 
 7.5.1. Elution solvents (4.4) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.5.2. Suggested eluting gradient: 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.5.4. Column equilibration 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.5.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.5.6. Perform the sequence of the chromatographic analyses keeping constant the run-to-run time in order to obtain constant retention times. Inject the external standard solution (7.3) every 5-10 test sample solutions in order to calculate the response factor 0 
 7.6. Integration mode 
 7.6.1. PEDP peak 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.6.2. Tryptamine peak 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.6.3. PS and PE peaks groups 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. CALCULATION AND EXPRESSION OF RESULTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9. ACCURACY OF THE METHOD 
 9.1. Repeatability 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2. Reproducibility 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10. REFERENCES 
 10.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX XV
(Article 11)DETECTION OF ANTIMICROBIAL RESIDUES IN SKIMMED MILK POWDER 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Positive results are to be interpreted as follows: 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX XVI
(Article 12)QUANTITATIVE DETERMINATION OF SKIMMED-MILK POWDER IN COMPOUND FEEDINGSTUFFS BY ENZYMATIC COAGULATION OF PARA-CASEIN 
 1. PURPOSE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. SCOPE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. PRINCIPLE OF THE METHOD 
 3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. APPARATUS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.8. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.9. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.10. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.11. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.12. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. PROCEDURE 
 6.1. Preparation of the sample 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.2. Dissolving of milk powder and separation of the insoluble residue 
 6.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.2.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.2.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3. Coagulation of casein with the enzymes of rennet 
 6.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.4. Determination of casein nitrogen 
 6.4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. BLANK TEST 
 7.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. EXPRESSION OF RESULTS 
 8.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9. ACCURACY OF THE METHOD 
 9.1. Repeatability 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2. Reproducibility 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10. OBSERVATIONS 
 10.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX XVII
(Article 13)DETECTION OF STARCH IN SKIMMED-MILK POWDER, DENATURED MILK POWDER AND COMPOUND FEEDINGSTUFFS 
 1. SCOPE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. REAGENTS 
 3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. APPARATUS 
 4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. PROCEDURE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. EXPRESSION OF RESULTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. REMARKS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX XVIII
(Article 14)DETERMINATION OF MOISTURE CONTENT IN DRIED CREAM 
 1. SCOPE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. TERMS AND DEFINITIONS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. APPARATUS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. SAMPLING 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. PREPARATION OF TEST SAMPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. PROCEDURE 
 7.1. Preparation of the dish 
 7.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. Test portion 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3. Determination 
 7.3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. CALCULATION AND EXPRESSION OF RESULTS 
 8.1. Calculation 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9. PRECISION 
 9.1. Repeatability 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2. Reproducibility 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10. TEST REPORT 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX XIX
(Article 15)DETERMINATION OF MOISTURE IN ACID BUTTERMILK POWDER 
 1. SCOPE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. PRINCIPLE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. APPARATUS 
 3.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. PROCEDURE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. CALCULATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. PRECISION 
 6.1. Repeatability limit 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.2. Reproducibility limit 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6.3. Source of precision data 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX XX
(Article 16)REFERENCE METHOD FOR THE DETERMINATION OF MILK FAT PURITY BY GAS CHROMATOGRAPHIC ANALYSIS OF TRIGLYCERDIES — REVISION 2 
 1. SCOPE AND FIELD OF APPLICATION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. DEFINITION 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. PRINCIPLE OF THE METHOD 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. REAGENTS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2. 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.2.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5. APPARATUS 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.1. High-temperature gas chromatograph 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2. Chromatography column 
 5.2.1. Packed column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.2.2. Capillary column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.7. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.8. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.9. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.10. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.11. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.12. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.13. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.14. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.15. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 5.16. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 6. SAMPLING 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7. PROCEDURE 
 7.1. Preparation of test samples 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.1. Isolation from butter or butteroil 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.2. Extraction according to the Röse–Gottlieb gravimetric method 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.1.3. Extraction from milk using silica gel columns 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.2. Preparation of sample solution 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3. Chromatographic triglyceride determination 
 7.3.1. Baseline drift 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.2. Injection technique 
 7.3.2.1. Packed column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.2.2. Capillary column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.3. Calibration 
 7.3.3.1. General 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.3.2. Commercial milk fat standard 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.3.3. Laboratory milk fat standard 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.4. Chromatographic conditions 
 7.3.4.1. Packed column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 7.3.4.2. Capillary column 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 8. INTEGRATION, EVALUATION AND CONTROL OF THE ANALYTICAL PERFORMANCE 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
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 9.1. Triglyceride composition 
 9.1.1. Calculation 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.1.2. Expression of test results 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2. S-values 
 9.2.1. Calculation 
 9.2.1.1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2.1.2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2.1.3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2.1.4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2.1.5. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2.1.6. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.2.2. Expression of test results 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 9.3. Detection of foreign fat 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10. PRECISION 
 10.1. Interlaboratory test 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.2. Repeatability 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 10.3. Reproducibility 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 11. UNCERTAINTY OF MEASUREMENT 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 12. TEST REPORT 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX A
(normative)PREPARATION OF THE PACKED COLUMN 
 A.1 REAGENTS AND APPARATUS 
 A.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.6 
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.6.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.6.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.6.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.6.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.6.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.6.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.1.6.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 A.2 SILANIZATION (DEACTIVATION OF THE GLASS SURFACE) 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.3 FILLING 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.4 CONDITIONING 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX B
(informative)QUANTIFICATION OF THE FOREIGN FAT CONTENT 
 B.1 GENERAL 

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 B.2 CALCULATION 

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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 B.3 EXPRESSION OF TEST RESULTS 

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Bibliography 

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ANNEX XXI
(Article 18)PROCEDURE APPLICABLE WHEN THE RESULTS OF AN ANALYSIS ARE DISPUTED (CHEMICAL ANALYSIS) 
 1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 3. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
 4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

ANNEX XXII
CORRELATION TABLE

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
